EliVisionTM super/HRP试剂盒是EliVisionTM plus/HRP试剂盒的进一步发展,是根据聚合物技术将更多个抗鼠或/和抗兔的IgG分子与辣根过氧化物酶结合在多聚物上,所形成的聚合物与第一抗体结合,从而放大了抗原抗体结合的信号。其染色步骤如下:
1、石蜡切片脱蜡、水化,自来水冲洗;
2、根据第一抗体的要求,对组织进行相应的抗原修复;
3、如有必要(组织含内源性过氧化物酶),切片上滴加过氧化物酶阻断试剂,室温下孵育10分钟,PBS冲洗3次,每次3分钟(3×3分钟);
4、除去PBS,切片上滴加第一抗体,室温下孵育60分钟或4℃过夜。PBS冲洗3×3分钟;
5、除去PBS,切片上滴加放大剂,室温下孵育10分钟,PBS冲洗3×3分钟;
6、除去PBS,切片上滴加多聚酶结合物,室温下孵育10分钟,PBS冲洗3×3分钟;
7、除去PBS,切片上滴加新鲜配制的DAB或AEC显色试剂显色;
8、自来水冲洗终止显色,苏木素复染,(如有必要可用1%盐酸乙醇分化),PBS返蓝。如果用DAB显色,则切片经梯度乙醇脱水,二甲苯透明,中性树胶封固,如果用AEC显色,则切片不能经乙醇脱水,而直接用水性封固剂封固。